nc膜和pvdf膜区别(pvdf膜wb)

pvdf膜wb

wb膜就是用WB技术做出来的几种膜，有Nc膜，尼龙膜，PVDF膜。

WB是一种把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜)，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测。WB采用抗体作为探针，抗体可以与附着在固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。这种技术的作用是对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)中的某一特异蛋白进行鉴别和半定量分析，旨在鉴别特异性蛋白的类型(如亚型、聚体、剪切体等)和蛋白表达量的变化。

pvdf膜wb用甲醇和乙醇

western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用 在western blot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。

封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。

所以western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用

pvdf膜WB实验

蛋白质印迹（免疫印迹试验）即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息

蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所（Friedrich Miescher Institute）Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981所著《析物化》（Analytical Biochemistry）首称Western Blot蛋白免疫印迹（Western Blot）电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面

pvdf膜wb用甲醇

能用。Blot（WB），蛋白免疫印迹法，一句话，定性、定量检测蛋白表达的一种经典、有效的技术方法。

将电泳分离的细胞或组织蛋白转移到PVDF膜上，用特定抗体结合蛋白抗原，再结合标记的二抗，以化学发光的方式可视化地将蛋白表达情况呈现在人们面前，是几乎每一位生物汪或科研汪的“必怀利器”。

Western Blot的Protocol那么多，然鹅，没有一款是适合你自己的。辛辛苦苦做了两天，还不包括前期的细胞培养、蛋白提取等等。

pvdf膜wb用多大um?

转膜实验原理与操作步骤

转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定，是进行各种后续研究(如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。

实验目的：

掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤

实验原理：

1. 转膜的方式：

向上的毛细管转移

向下的毛细管转移

同时向两张膜转移

电转移

真空转移

2. 固相支持物的种类及选择：

硝酸纤维素膜：非共价结合，易脆，易丢失DNA ， < 500 bp 的DNA 无效，转膜前的工作(从提高转膜效率，利于转膜后使用等)。

尼龙膜(带正电荷的)高强度，不易破损，具有较大的DNA 结合容量，它能够吸附变性DNA ，核酸以共价结合方式不可逆的结合在尼龙膜上。尼龙膜两边均有吸附DNA 的功能，无论用哪边均可以经久耐用，可反复利用 10 次以上( 10-20 次)，经毛细管(毛细吸附)作用，把DNA 从凝胶上转到膜上。DNA 转到膜上是复制胶上的带型，在 80-100 ℃真空干燥 2-4 hrs ，即可固定DNA 。

3. 转移缓冲液( transfer buffer )的选择：

带正电荷的尼龙膜：可用高盐离子强度( SSC )，但不能充分发挥膜潜能; 0.4N NaOH ，共价结合DNA 是最大优点。

硝酸纤维膜：高盐离子强度促进DNA 与膜结合( 20 × SSC )，低盐离子强度导致小片段DNA 在转移过程中丢失， pH>9 ，DNA 不能与膜结合。

4. 转膜时间( duration of transfer )约 12 hrs。

取决于毛细管系统，DNA 大小，胶厚度 (<5 mm) 及浓度 (<1%) 。

DNA 分子量大小决定时间长短，部分去嘌呤减小DNA ，碱转移 2hrs 大部分结合到膜。

DNA 转移的效率较难判断，只有在转膜结束后，通过 EB 染胶，及分子杂交才可以鉴别效率高低，但已无补救措施，因此，每一步应严格操作。

实验材料及试剂： 酶消化好的DNA 样品，尼龙膜， 0.2NHCl ， 0.4N NaOH 等。

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PVDF膜有两种，一种是0.2um的，一种是0.4um的。

0.45μm孔径和0.2μm孔径，一般来说0.45μm孔径适合于>20kD的蛋白质转印，0.2μm孔径适合<20kD的蛋白质转印。

0.2μm孔径的PVDF膜吸附量会比较大，从而会导致背景很高！

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染色原理：丽春红，也称猩红，带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。

丽春红染色液，用于WB转膜效率检测，它与下游WB检测完全兼容，无任何干扰。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或者其他溶液洗去。可用于PVDF膜、硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜上蛋白的检测，不适用于尼龙膜上的蛋白检测。